Kuvaus

Rajoitusentsyymit ovat entsyymejä, jotka pystyvät pilkkomaan tai leikkaamaan DNA-molekyylejä erittäin tarkasti DNA-molekyylin emäsjärjestyksen perusteella. Niiden löytäminen ja eristäminen 1900-luvun jälkipuoliskolla tarjosi tutkijoille korvaamattoman työkalun ja laajensi nopeasti molekyylibiologian alaa. Agaroosielektroforeesi on tekniikka, jolla erotellaan rajoitusentsyymien käytöstä syntyvät DNA-palat. Tässä aktiviteetissa opiskelijat suorittavat agaroosielektroforeesin kolmelle DNA-näytteelle, jotka on jo käsitelty rajoitusentsyymeillä. Yksi näyte on leikattu entsyymillä HindIII, yksi on leikattu entsyymillä EcoRI ja yksi on leikattu molemmilla entsyymeillä. Agaroosigeelille muodostuva DNA-nauhojen kuvio osoittaa, että kukin entsyymi vaikuttaa DNA:han eri tavalla. Opiskelijat oppivat paitsi DNA-elektroforeesin prosessista myös prosessiin liittyvistä tekniikoista, kuten agaroosigeelin valmistamisesta, DNA-näytteiden lataamisesta agaroosigeeliin ja geelin värjäämisestä DNA-nauhojen visualisoimiseksi. He oppivat myös määrittämään tuntemattomien DNA-fragmenttien koot tarkasteltuaan tuloksiaan. Paketti sisältää erityiskäsiteltyjä DNA-näytteitä, jotka eivät vaadi jäähdytystä tai pakastamista, valmiiksi valmistettua agaroosia, joka voidaan yksinkertaisesti sulattaa kuumavesihauteessa tai mikroaaltouunissa, TBE-elektroforeesipuskurin ja DNA-värin. DNA:ta on riittävästi 10 geelin ajamiseen.

Paketti sisältää:

• 200mL Valmistettua Agaroosia, 0,8% liuos
• 500mL Tris Borate ETA -puskuria, 5X
• 60mL DNA-väriä, 20X
• 100 µL Lambda DNA/EcoRI Digest latausvärillä
• 100 µL Lambda DNA/HindIII Digest latausvärillä
• 100 µL Lambda DNA/EcoRI,HindIII Digest latausvärillä

Tarvitaan mutta ei toimiteta: agaroosielektroforeesikammioita, virtalähteitä ja mikropipettejä, jotka pystyvät mittaamaan 10µL.